БСА (М=68 кДа) Трипсин (М=24 кДа)

Рис 1.

Далее осуществляли перенос фракционированных белков с пластины полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную мембрану по методам Bjerrum and Schafer-Neilsen. После электроблоттинга, нитроцеллюлозную мембрану обрабатывали моноклональными антителами гибридомы В10, специфичной поликлональной сывороткой и нормальной сывороткой. Используемые пробы были следующего состава: проба № 1 - лизат бактериальной массы Helicobacter pylori кокковидной формы и МКА гибридомы В 10, проба № 2- лизат бактериальной массы Helicobacter pylori вегетирующей формы и МКА гибридомы В 10, проба № 3 - лизат бактериальной массы Helicobacter pylori кокковидной формы и специфическая поликлональная сыворотка, проба № 4 - лизат бактериальной массы Helicobacter pylori вегетирующей формы и специфическая поликлональная сыворотка, проба № 4 - лизат бактериальной массы Helicobacter pylori вегетирующей формы и нормальная мышиная сыворотка (контроль), проба № 5 - белковые метчики (бычий сывороточный альбумин (М=68 кДа) и химотрипсин (М=24 кДа)).

После проявления иммуноблота, полученную картину документировали путём сканирования. Блоттограмма приведёна на Рис 2.

Электрофоретический профиль белков H. pylori №1№2 №3

Блоттограмма антигенных фракций H. pylori №1 №2 №3 №4 №3 №5

Альбумин

Трипсин

Рис 2.

Согласно блоттограмме моноклональные антитела взаимодействуют с белковым антигеном, молекулярной массой 30 кДа в одинаковой степени, как у кокковидной, так и у вегетирующей формы H. pylori (Дорожка № 1 и № 2) Специфическая поликлональная сыворотка даёт более пёструю картину взаимодействия с белковыми антигенами (Дорожка № 3 и № 4).

Обсуждение результатов.

На сегодняшний день можно считать практически доказанной роль бактерии Helicobacter pylori в этногенезе язвенных и онкологических патологий желудочно-кишечного тракта. Несмотря на допускаемые симбиотические взаимоотношения человека и H. pylori, это микроорганизм всё же является одним из самых существенных факторов риска развития язвенной болезни желудка, язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, хронического гастрита, аденокарциномы желудка. В связи с этим изменилось представление о методах лечения и диагностики этих заболеваний. Теперь всё большее внимание уделяется неинвазивным методам их диагностики. Проводится усовершенствование методов с целью снижения времени проведения анализа, повышения его достоверности и снижения стоимости диагностики. Одним из путей решения данной проблемы является использование моноклональных антител для создания диагностического препарата по определению возбудителя.

Моноклональные антитела являются сегодня наиболее эффективным инструментом, с помощью которого возможно, с одной стороны, проведение тонких исследований антигенной композиции микробной клетки, выяснение функций отдельных антигенных детерминант, с другой - повышение чувствительности и

Литература

1.Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие). М.: Наука, 1981. 288с.

2.Инструкция к применению Hybridoma Screening Kits. Calbiochem Immunochemicals/ Cat №38644

специфичности серологического анализа, создание на их основе новых, более точных и быстрых методов идентификации и дифференциации.

Выяснение биологических и иммунохимических свойств антител и распознаваемых ими антигенов является необходимым условием их последующего успешного применения в диагностических целях, и нашей задачей было изучение свойств МКА, секретируемых гибридомой В10, полученной в лаборатории «гибридом» РПЧИ.

По данным иммуноблоттинга, поверхностный белковый антиген с молекулярной массой 30 кДа связывается с моноклональными антителами гибридомы В10. Согласно литературным источникам, это может быть пориновый белок бактерии, одновременно выполняющий функцию адгезии микроорганизма на клетках эпителия слизистой оболочки желудка; это говорит о его присутствии во всех штаммах H. ру^п.

Как видно из рис. 2, белковый антиген, обнаруживаемый моноклональными антителами гибридомы В10, присутствует в равной степени как у кокковидной, так и у вегетирующей форм. Кроме того, было выяснено, что моноклональные антитела взаимодействуют в равной степени с антигеном кокковидной формы и антигеном активной вегетирующей формы. Эти факты говорят в пользу антител, продуцируемых гибридомой В10, как кандидата на создание тест-системы по определению Helicobacter pylori.

Таким образом, исходя из вышеизложенного, представляется достаточно перспективной дальнейшее изучение иммунохимических свойств антител, продуцируемых гибридомой В10, с целью разработки на их основе точного и быстрого диагностикума Н. pylori-инфекции.